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5 fatores que afetam a alta fluorescência de fundo em tiras de teste imunocromatográfico

2024-07-02
Você já se perguntou por que as tiras de teste que você fabrica apresentam valores de fundo altos e instáveis ​​sob um instrumento de imunoensaio de fluorescência, independentemente de como você as ajusta? Este artigo analisará cinco fatores que levam a níveis elevados de fundo em tiras de teste imunocromatográficas.


  1. Grande microesferas com pequeno tamanho de NC membranas
  2. Inadequado controle de açúcar conteúdo
  3. Inadequado controle de polímero conteúdo
  4. Inadequado controle de sal concentração em o sistema
  5. Influência de buffer sal tipos





1. Grande Microesferas com Pequeno Poro Tamanho de NC Membranas


Esse motivo é fácil de entender. Microesferas de grande diâmetro diminuem a velocidade cromatográfica através de membranas de poros pequenos. Dentro do tempo especificado, as microesferas não conseguem cromatografar completamente da membrana até a almofada de absorção, deixando valores de fundo de fluorescência na membrana.



2. Como para Entenda o Causa de Açúcar Conteúdo?

Muitos pesquisadores gostam de adicionar sal tampão de baixa concentração + proteína protetora + açúcar + surfactante + polímero à solução de processamento da almofada conjugada. Embora a composição seja a mesma, os resultados diferem devido às diferentes quantidades utilizadas. Sabe-se que a adição de açúcar à solução de processamento da almofada conjugada pode proteger as proteínas de condições extremas e tem boa hidrofilicidade sem participar de reações. No entanto, uma alta concentração de açúcar aumenta a viscosidade da solução. Se altas concentrações de açúcar forem adicionadas à almofada conjugada, a viscosidade da diluição da amostra adicionada aumenta, retardando a liberação de outras substâncias na diluição, resultando em fundo elevado, pois grandes polímeros ou microesferas permanecem na membrana.


3. Polímero Conteúdo

Altas concentrações de polímeros na almofada conjugada podem ser problemáticas. Alguns usam PVP-10, alguns PVP K30, alguns PEG e alguns PVA. Independentemente de qual seja utilizado, é essencial determinar se são necessários e o peso molecular e a concentração adequados. Por exemplo, o PVP K30, com grande peso molecular, possui efeitos adesivos, estabilizadores e espessantes, mas altas concentrações podem aumentar a viscosidade da solução, afetando o efeito cromatográfico na membrana e resultando em valores de fundo elevados.


4. Sal Concentração em o Buffer Sistema

Isso se refere a todo o sistema, não apenas a uma única diluição de amostra ou solução de processamento de bloco de amostra. Todo o sistema inclui a almofada de amostra, a diluição da amostra, a almofada de conjugado e a solução de reconstituição de microesferas. A concentração de íons salinos afeta os efeitos cromatográficos e foi verificada em projetos anteriores. Este fator pode servir como orientação para otimizar os efeitos cromatográficos.


5. Influência de Buffer Sal Tipos

É sabido que diferentes sais tampão têm efeitos diferentes, mas alguns podem ser mais adequados para determinados projetos do que outros, alguns podem resultar em valores de fundo altos/baixos. Isto está relacionado com as propriedades químicas dos próprios sais tampão. (Para obter mais informações sobre vários sais tampão, siga as redes sociais da BIOEAST.)


Resumo

  1. Para melhorar plano de fundo valores em imunocromatográfico teste tiras, reduzir açúcar conteúdo (recomendado 3-5%).
  2. Reduzir polímero conteúdo (recomendado 0,1-1%) baseado ligado específico condições.
  3. Melhorar o do sistema sal íon concentração (em torno 100mMol) como necessário para diferente projetos.
  4. Alteração do tipo de sais na formulação do tampão  pode fornecer alguma melhoria.

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